| 王燕,唐历波,张青峰.pEGFP—C1-miR-335重组质粒的构建及其在乳腺癌细胞中的表达.[J].中南医学科学杂志.,2009,(5):525-527. |
| pEGFP—C1-miR-335重组质粒的构建及其在乳腺癌细胞中的表达 |
| Construction of pEGFP-C1-miR-335 Recombinant Plasmid and Observation of its Expression in Breast Cancer Cells |
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| DOI： |
| 中文关键词: 微小RNA 乳腺癌细胞 |
| 英文关键词:miR-335 pEGFP-C1 |
| 基金项目: |
| 王燕 唐历波 张青峰 |
| 遵义医学院,珠海校区,广东,珠海,519041? |
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| 中文摘要: |
| 目的 构建携带融合型microRNA(微小RNA)基因miR-335的荧光真核表达质粒pEGFP-C1-miR-335,并观察其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.为研究小RNA基因表达调控机制建立实验基础. 方法 应用基因重组技术,从人类基因组DNA中扩增miR-335的前体序列,经PCR引物加入酶切位点, 酶切后插入荧光真核表达载体pEGFP-C1, 构建miR9真核表达载体pEGFP-C1-miR-335, 然后进行酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入MDA-MB-231细胞,24 h后观察荧光蛋白表达情况,用Northern blot方法检测miR-335表达. 结果 酶切和测序鉴定证实插入miR-335前体片段序列正确.细胞转染24 h后,荧光显微镜下观察到GFP表达,60%左右转染细胞发出荧光.Northern blot检测到miR-335表达. 结论 成功构建pEGFP-C1-miR-335荧光真核表达载体,并可在乳腺癌细胞中有效表达. |
| 英文摘要: |
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