| 李杰,于文,张艳,靖吉芳.幽门螺杆菌尿素通道蛋白ureI基因真核表达载体的构建及表达.[J].中南医学科学杂志.,2010,(2):. |
| 幽门螺杆菌尿素通道蛋白ureI基因真核表达载体的构建及表达 |
| Construction and Expression of Eukaryotic Expression Vector of Urea Channel Protein Gene (ureI) from Helicobacter Pylori |
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| DOI： |
| 中文关键词: 幽门螺杆菌 尿素通道蛋白 表达 |
| 英文关键词: |
| 基金项目:湖南省自然科学基金(06JJ2093);;湖南省教育厅青年基金(08B067)项目 |
| 李杰 于文 张艳 靖吉芳 |
| 南华大学病原生物学研究所; |
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| 中文摘要: |
| 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori)尿素通道蛋白编码基因(ureI)的真核表达重组载体,并在HeLa细胞中表达,为核酸疫苗的研制奠定基础。方法以H.pyloriSS1株基因组为模板,PCR扩增ureI目的基因片段,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;通过酶切、PCR及测序鉴定,筛选阳性重组载体;脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,Western blot检测其在HeLa细胞中的表达。结果以H.pyloriSS1株基因组DNA为模板扩增出特异的ureI基因片段,大小约585 bp;双酶切及测序鉴定证明成功构建了H.pylori真核表达重组载体pcDNA3.1(+)/ureI;该重组质粒能够在HeLa细胞中表达目的蛋白。结论成功构建了真核重组载体pcDNA3.1(+)/ureI,并能在HeLa细胞中表达。 |
| 英文摘要: |
| Objective To construct the recombinant plasmid containing the ureI gene of Helicobacter pylori(H.pylori),and to detect its expression in HeLa cells,and to lay a foundation for furture studying the H.pylori DNA vaccine.Methods The ureI gene of H.pylori SS1 was amplified by polymerase chain reaction(PCR).The PCR product was subcloned into appropriate site of pcDNA3.1(+) eukaryotic expression vector by restriction enzyme digestion and linking reactions.The positive recombinant was identified by restriction end... |
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