| 李忠玉,吴移谋,黄秋林,周洲.沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定.[J].中南医学科学杂志.,2010,(1):. |
| 沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定 |
| Construction and Identification of Eukaryotic Expression System for pORF5 Gene of Chlamydia Trachomatis |
| |
| DOI： |
| 中文关键词: 沙眼衣原体 pORF5基因 真核表达 |
| 英文关键词:Chlamydia trachomatis pORF5 gene eukaryotic expression |
| 基金项目:国家自然科学基金(30970165);;湖南省自然科学基金(09JJ3059) |
| 李忠玉 吴移谋 黄秋林 周洲 |
| 南华大学微生物学与免疫学教研室; |
| 摘要点击次数: 761 |
| 全文下载次数: 0 |
| 中文摘要: |
| 目的构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定。方法PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达。结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件。 |
| 英文摘要: |
| Objective To construct eukaryotic expression plasmid pDSRed-C1/pORF5 based on gene pORF5 of Chlamydia trachomatis,and establish a stable expression system. Methods pORF5 gene was amplified by PCR and cloned into appropriate site of pDSRed-C1 vector to construct eukaryotic expression plasmid pDSRed-C1/pORF5.After identification by PCR,restrictive enzymes digestion and sequencing,the recombinant plasmid was transfected into HeLa-229 cells by using Liposome.Finally,the pORF5 gene expression of protein was dete... |
| 查看全文 查看/发表评论 下载PDF阅读器 |
| 关闭 |
|
|
|