| 龙跃生,孙卫文,赵绮华,曾涛,廖卫平.钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果.[J].中南医学科学杂志.,2009,(3):257-260. |
| 钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果 |
| Construction of the Vector Expressing SCN1A Short-hairpin RNA and Silencing Gene Expression in HEK293 Cell |
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| DOI： |
| 中文关键词: RNA干扰 钠通道 癫痫 |
| 英文关键词: |
| 基金项目:国家自然科学基金项目，广东省自然科学基金项目? |
| 龙跃生 孙卫文 赵绮华 曾涛 廖卫平 |
| 广州医学院,第二附属医院,神经科学研究所,广东,广州,510260? |
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| 中文摘要: |
| 目的 采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA(shRNA)稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达.方法 PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白(GFP)与发夹结构RNA(shRNA)融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒(pCMV-EGFP)分别与SCN1A基因表达质粒(pCMV-SCN1A)共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况.结果 与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mRNA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1.结论 shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达.该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具. |
| 英文摘要: |
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