| 李利平,孙曼莉,凌国灿.pEGFP-HPV16 E6重组质粒的构建及其在Hela细胞中的表达定位.[J].中南医学科学杂志.,2007,(3):350-354. |
| pEGFP-HPV16 E6重组质粒的构建及其在Hela细胞中的表达定位 |
| The Construction of pEGFP- HPV16E6 Fusion Gene in Eukaryotic Expression Vector and its Expression in Hela Cells |
| 修订日期：2007-02-24 |
| DOI： |
| 中文关键词: GFP表达载体 表达定位 |
| 英文关键词:HPV16 E6 |
| 基金项目:湖南省科技厅专项科研基金 |
| 李利平 孙曼莉 凌国灿 |
| 株洲市第一人民医院妇产科,湖南株洲412000 |
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| 中文摘要: |
| 目的 构建以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-HPV16 E6.方法 利用脂质体转染体外培养的Hela细胞,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察pEGFP～HPV16 E6融合蛋白在细胞中的分布和定位,用Western blot方法验证其蛋白的表达.结果 在空载体pEGFP-C2转染组中,Hela细胞内绿色荧光呈弥散分布;重组质粒pEGFP-HPV16 E6转染组中,绿色荧光集中在细胞核中.结论 pEGFP-HPV16 E6融合基因真核表达载体在真核细胞Hela中获得了表达,细胞所表达的融合蛋白具有HPV16 E6和EGFP的双重活性,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,为HPV16 E6的功能研究提供了线索. |
| 英文摘要: |
| Objective To construct pEGFP-HPV16 E6 fusion gene in eukaryotic expression vector and to investigate its expression in Hela cells.Methods HPV16 E6 ORF was amplified from PCR2.1-HPV16E6 by PCR and inserted into plasmid pEGFP-C2.Using lipofectin method,the recombinant expression plasmid pEGFP-HPV16 E6 was transfected into Hela cells.Conclusions The results showed that pEGFP-HPV16 E6 expressed a fusion protein with green fluorescence protein in Hela cells as defined by Western blot analysis.This fusion protein was localized in the nucleus of Hela cells as detected by fluorescence microscopy. |
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