| 王静,蒋永林,李金丽,蔡恒玲,万艳平.乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达.[J].中南医学科学杂志.,2006,(3):320-323. |
| 乙型肝炎病毒X基因真核表达载体的构建及表达 |
| Construction and Expression of Eukaryotic Vector for HBV X |
| 修订日期：2006-04-23 |
| DOI： |
| 中文关键词: 乙肝病毒(HBV) X基因 X蛋白 真核表达 |
| 英文关键词:HBV,X gene,X protein,eukaryotic expression., |
| 基金项目:湖南省卫生厅科研项目 |
| 王静 蒋永林 李金丽 蔡恒玲 万艳平 |
| 南华大学病原生物学研究所,湖南衡阳421001 |
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| 中文摘要: |
| 目的构建含乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus，HBV）X基因的真核表达载体，为探讨HBVX基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系提供实验依据。方法用PCR方法扩增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列，对pcDNA3．1（＋）载体及X基因PCR产物双酶切，用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性克隆，并对其进行双酶切和测序鉴定，构建HBVX基因真核表达载体pcDNA3．1（＋）-HBx。用梭华-Sofast^TM基因转染试剂将其质粒转染THP-1巨噬细胞，细胞裂解液经SDS-PAGE及转硝酸纤维素膜后做Western blotting，鉴定目的蛋白。结果双酶切pcDNA3．1（＋）-HBx后，琼脂糖电泳可分别见到大小约为5．4kb和465bp片断，说明X亚克隆入pcDNA3．1（＋），经序列测定其含有完整的X基因片段；Western blotting结果显示pcDNA3．1（＋）-HBx能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3．1（＋）-HBx，并能在THP-1巨噬细胞中表达X蛋白。 |
| 英文摘要: |
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